杭州交通信息网幼儿园亲子活动好处:谁能帮忙翻成中文（急）
来源：百度文库 编辑：杭州交通信息网 时间：2024/04/27 21:56:57
Rep binds to ssDNA with a rate constant ,20 times slower than the
diffusion-limited value15, so a Rep that dissociates completely from
DNA is much more likely to diffuse away than to rebind to the same
DNA. Therefore, repetitive shuttling is unlikely to be due to complete
dissociation and rebinding of Rep. To remain bound to the DNA
during snapback, the protein either has to slide all the way towards
the 30 end in less than 15 ms, or has to make simultaneous contacts
with the junction and the 30 end.We favour the latter mechanism, on
the basis of the following studies of DNA conformations during
translocation (Fig. 2a). In the presence of unlabelled Rep and ATP, a
DNAwith a 30 (dT)40 tail labelled at the near extremities with a donor
and an acceptor showed mostly low FRET values (,0.4) but with
brief, regular spikes to high FRETefficiency (,0.7; spikes had average
duration 0.17 s) (Fig. 2b). No such spikes were observed from DNA
alone. The average period of this pattern is 0.7 s, very similar to the
period of the sawtooth pattern observed with labelled Rep translocating
along a 40-nt tail.We therefore interpret the high FRETspike
as reflecting the simultaneous binding of Rep to both the junction
and the 30 end of the ssDNA, resulting in the transient formation of a
DNA loop. This mechanism requires at least two distinct DNA
binding sites on the Rep monomer, the primary binding site as
observed in crystal structures24,27 and the secondary binding site for
the 30 end. We suggest that a blockade encounter induces Rep
conformational changes that increase the DNA affinity of the
secondary binding site. The loop formation can follow immediately
because ssDNA is highly flexible and its conformational fluctuations
are much faster than our time resolution28.
We next investigated whether Rep undergoes conformational
changes coupled with repetitive shuttling. Rep is structurally homologous
to another superfamily 1 helicase PcrA, and is composed of
four subdomains (1A, 2A, 1B and 2B)24,27. The 2B subdomain of Rep
is dispensable for unwinding29 and ssDNA translocation17. Rep was
crystallized in two forms, open (Fig. 2c) and closed, which differ in
the 2B subdomain orientation27. A PcrA bound to a 30 -tailed dsDNA
was crystallized in the closed form (Fig. 2d)24 and Rep bound to a
30 -tailed dsDNA in solution favours the closed form14. To test
whether the 2B subdomain closes as Rep approaches the junction,
we engineered a double-cysteine mutant of Rep (positions 97 and 473
on the 1B and 2B subdomains, respectively) and labelled it stochastically
with Cy3 and Cy5 so that 2B closing would result in a FRET
increase (Fig. 2c and d). it moves on unlabelled DNA with a 30 (dT)80 tail (Fig. 2e). A
representative time trace in Fig. 2f shows several cycles of gradual
FRET increase and an abrupt FRET decrease.
重复的穿梭往返的身体检查机制
Rep 用一个比率常数绑住 ssDNA,20 次慢地超过那
散布-有限价值 15, 因此完全地分离的 Rep 从
DNA 是加较多的有可能的散播离开超过重捆到相同的
DNA。 因此, 重复的穿梭往返不可能预定完成
分解而且共和党员的重捆对 DNA 保持约束
在 snapback 期间, 蛋白质也必须滑动所有的方法向
在少于 15 ms 中的 30 结束, 或必须作同时的连络
藉由联接和 30 结束。我们赞同后者机制, 在
DNA 构造的下列研究的基础在
translocation.(图 2 一) 在不贴上标签的 Rep 和 ATP 之前, 一
DNAwith 一只 30(dT)40只尾部贴上标签在和一位捐赠人的近极端
而且一个接受者表示大概低的烦躁价值 (,0.4) 但是由于
作摘要, 高的 FRETefficiency 的老客户长钉 (,0.7; 长钉有了平均
期间 0.17 年代)(图 2b). 没有如此的长钉从 DNA 被观察
孤独的。 平均时期的这一个式样是 0.7 年代, 非常相似的到那
锯齿式样的时期以移动位置到的贴上标签的 Rep 观察
向前一 40 nt 的附于其后。我们因此解释高的 FRETspike
当做反映对两者的联接 Rep 的同时装订
而且 ssDNA 的 30 结束, 造成短暂形成一
DNA 成环。 这一个机制至少需要二个清楚的 DNA
在 Rep 单体上的装订位置, 提名候选人的预选会装订位置当做
在水晶的结构 24,27 和中级的装订位置中观察
30 结束。 我们建议一次阻塞相会引诱 Rep
增加 DNA 密切关系的构形的变化那
中级的装订位置。 环形成能立刻跟随
因为 ssDNA 高度地有柔性和它的构形变动
比我们的时间第 28 条决议案快速许多。
我们然后调查 Rep 是否遭受构形的
变化以重复的穿梭往返加倍了。 Rep 结构相应
对另外的一个总科 helicase PcrA, 和由
四个次领域 (1A ， 2A ， 1B 和 2B)24,27. Rep 的 2B 次领域
对展开 29 是不是必要的和 ssDNA translocation 17. Rep 是
以二种表格结晶了, 公开 (图 2c) 和关闭, 哪一个不一致在
2B 次领域定方位 27. PcrA 约束的到一 30-附于其后 dsDNA
以关闭表 24 和 Rep 被结晶约束的到一
30-附于其后解决好意的 dsDNA 关闭形式 14. 测试
是否当 Rep 接近联接的时候， 2B 次领域关,
我们设计了一个 Rep 的双胱胺酸突变异种 (位置 97 和 473
在 1B 和 2B 次领域上, 分别地) 和随机程序贴上标签它
藉由 Cy3 和 Cy5 以便 2B 结束会造成烦躁
增加 (图 2c 和 d) 。 它用一只 30(dT)80只尾部 (图 2e) 继续不贴上标签的 DNA 。 一
在图 2f 的代表性的时间痕迹表示一些周期逐渐的
烦躁增加和突然的烦躁减少。
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物理机制反复穿梭 具有颁发给ssDNA有慢的速度持续时间[20] 传播有限value15,颁发了该彻底洗刷 DNA更不是可能分散了对同样rebind DNA. 因此,不可能因反复穿梭才能完成 斯尼亚和过去的保持一定的DNARep. snapback期间,凡以蛋白质为一路下滑 30年底不到15余,同时取得或接触 30、与联合机制End.we赞成后者, 根据下列在研究DNAconformations 迁移(附图2A). 在场的标签,并颁发自动保障, dnawith3040尾(T)在近末端有标签捐赠 主要表现和受体Fret价值低,但(,0.4) 简单来说,经常会有高fretefficiency(,0.7; 平均消费 0.172B期S)(附图). 没有几个人看到从DNA 单. 这种模式的平均时间是70世纪70年代以后,非常类似于 Sawtooth时期的代表作格局上观察translocating 沿40新台币Tail.we因此将高Fretspike 同时反映对联合颁发装订 与30月底的ssDNA,造成短暂的形成 DNA环. 这个机制至少需要两个不同的DNA 单体遗址约束力的代表作,主要是约束网站 6、27、水晶纪念中学structures24约束力地点 30结束. 我们建议,遇到封锁导致汇率 conformational变动增加DNA的亲和力 二级网站约束力. 可以立即组建起色 ssDNA非常灵活,因为它波动conformational 远远高于我们时代的决议. 经过调查,未来我们是否颁发conformational 加上变化反复穿梭. 围绕结构代表作 另一PCRAhelicasesuperfamily1,由 4subdomains(1A、2A、1B、2B)测定. 相对的,2Bsubdomain 为与ssDNAtranslocation17unwinding29可有可无. 已颁发 具体有两种形式,公开(附图2C)、关闭,不同 subdomainorientation27的2B. 有一定PCRA30尾dsDNA 被关闭的具体形式和24(附图2D)方向的代表作 30尾dsDNA主张在解决form14关闭. 试验 是否为关2Bsubdomain联合颁发的办法, 我们设计的双突变的相对cysteine(97、473职位 在1B和2Bsubdomains分别),它的标签stochastically 在Cy3和Cy5,最后将导致2BFret 增加(附图2C和D). 它有30个DNA移动标签(T)80尾(附图2E). 一 在随后的时间追踪代表. 2F逐渐显示几轮 Fret增加和减少突然有了心事.
物理机制反复穿梭 具有颁发给ssDNA有慢的速度持续时间[20] 传播有限value15,颁发了该彻底洗刷 DNA更不是可能分散了对同样rebind DNA. 因此,不可能因反复穿梭才能完成 斯尼亚和过去的保持一定的DNARep. snapback期间,凡以蛋白质为一路下滑 30年底不到15余,同时取得或接触 30、与联合机制End.we赞成后者, 根据下列在研究DNAconformations 迁移(附图2A). 在场的标签,并颁发自动保障, dnawith3040尾(T)在近末端有标签捐赠 主要表现和受体Fret价值低,但(,0.4) 简单来说,经常会有高fretefficiency(,0.7; 平均消费 0.172B期S)(附图). 没有几个人看到从DNA 单. 这种模式的平均时间是70世纪70年代以后,非常类似于 Sawtooth时期的代表作格局上观察translocating 沿40新台币Tail.we因此将高Fretspike 同时反映对联合颁发装订 与30月底的ssDNA,造成短暂的形成 DNA环. 这个机制至少需要两个不同的DNA 单体遗址约束力的代表作,主要是约束网站 6、27、水晶纪念中学structures24约束力地点 30结束. 我们建议,遇到封锁导致汇率 conformational变动增加DNA的亲和力 二级网站约束力. 可以立即组建起色 ssDNA非常灵活,因为它波动conformational 远远高于我们时代的决议. 经过调查,未来我们是否颁发conformational 加上变化反复穿梭. 围绕结构代表作 另一PCRAhelicasesuperfamily1,由 4subdomains(1A、2A、1B、2B)测定. 相对的,2Bsubdomain 为与ssDNAtranslocation17unwinding29可有可无. 已颁发 具体有两种形式,公开(附图2C)、关闭,不同 subdomainorientation27的2B. 有一定PCRA30尾dsDNA 被关闭的具体形式和24(附图2D)方向的代表作 30尾dsDNA主张在解决form14关闭. 试验 是否为关2Bsubdomain联合颁发的办法, 我们设计的双突变的相对cysteine(97、473职位 在1B和2Bsubdomains分别),它的标签stochastically 在Cy3和Cy5,最后将导致2BFret 增加(附图2C和D). 它有30个DNA移动标签(T)80尾(附图2E). 一 在随后的时间追踪代表. 2F逐渐显示几轮 Fret增加和减少突然有了心事.
今天要睡觉了，回个帖子做个标记，有空再给你翻译吧。
重复的穿梭往返 Rep 的实际机制绑到和一个比率常数的 ssDNA,20 次慢地比较那散布- 有限制的 value15, 因此完全地分离的 Rep 从 DNA 加对散播离开是更有可能的比较重捆到相同的 DNA。 因此，重复的穿梭往返不太可能预定完成分解而且共和党员的重捆保持约束的到 DNA 在 snapback 期间, 蛋白质或必须向小于 15 ms 的 30 结束滑动所有的方式, 或必须用联接和 30 结束来制造同时的连络。我们赞同较后者的机制, 在 translocation 期间以 DNA 构造的下列各项研究为基础.(图 2 一)在不贴上标签的 Rep 和 ATP 之前, 和一只 30(dT)40只被贴上标签的尾部一个 DNA 在那在极端的附近和一位捐赠人而且一个接受者大概低下地烦躁价值 (,0.4) ，但是由于摘要，老客户以大钉钉牢到高的 FRETefficiency(,0.7; 长钉有平均的期间 0.17 年代) 。 (图 2 b) 没有如此的长钉从 DNA 被观察孤独的。 这一个式样的平均时期是 0.7 年代, 非常相似的到锯齿式样的时期沿着一只 40 nt 尾部以贴上标签的 Rep 移动位置到观察。我们当做反映对两者的联接和 ssDNA 的 30 结束的 Rep 的同时装订，造成 DNA 环的短暂形成因此解释高的烦躁长钉。 这一个机制至少需要二个清楚的 DNA 绑在 Rep 单体上的位置 , 如水晶的 structures24 所观察的主要装订位置,27 和第二次的绑位置为30 结束。 我们一次阻塞相会引诱 Rep conformational 增加中级的装订 DNA 密切关系位置的变化。 因为 ssDNA 高度有柔性而且它的 conformational 变动比我们的时间 分辨率28 更加快速 , 所以环形成能立刻跟随。 我们然后调查是否 Rep 遭受 conformational 变化以重复的穿梭往返加倍。 Rep 结构地对另外的一个总科 1 helicase PcrA 是相应的, 而且由四个次领域 (1 A ， 2 A ， 1 B 和 2 B)24,27 组成。 Rep 的 2 B 次领域对 unwinding29 和 ssDNA translocation17 是不是必要的。 Rep 以二形式被结晶,开着的 (图 2 c) 和关闭, 不一致在2 B 次领域 orientation27。 约束的 PcrA 到一 30- 附于其后 dsDNA 在约束的关闭表 24 和 Rep 被结晶到一 30- 附于其后解决的 dsDNA 赞同关闭 form14。测试是否 2 B 次领域关当 Rep 接近联接的时候, 我们随机程序设计了 Rep( 位置 97 和 473 在 1 B 和 2 B 次领域上,分别地) 的一个加倍- 胱胺酸突变异种而且贴上标签了它藉由 Cy3 和 Cy5 以便关的 2 B 会造成烦躁增加。 (图 2 c 和 d) 它用一只 30(dT)80只尾部继续行进不贴上标签的 DNA 。 (图 2 e)代表性的时间在图 2 f 表演逐渐的烦躁增加的一些周期和一个突然的烦躁减少中追踪