tplinkwr2041n怎么样:简要说明目的基因制备的主要方法.

课本上有啊
高2生物下
第一个试验就是阿

实验十一 DNA的粗提取与鉴定
教学目的：
知识目标
识记：获得鸡血细胞的方法。
理解：(1)提取鸡血细胞核物质的方法。
(2)提取含杂质较少的DNA的方法。
(3)DNA鉴定的方法。
能力目标
1.理解相关溶液的作用机理，培养学生的分析能力。
2.通过DNA的粗提取，培养学生的动手能力。
情感目标
1.通过小组成员相互配合实验，培养学生的合作精神。
2.通过实验结果，使学生树立生命的物质性。
教学重点：
1.掌握DNA的粗提取与鉴定的技术。
2.理解各步骤中的实验原理。
教学难点：
DNA的粗提取
实验原理：
1.DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为0.14 mol/L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。
2.DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
材料用具：
材料
鸡血细胞液；预冷的95％的酒精溶液；蒸馏水；质量浓度为0.1 g/mL的柠檬酸钠溶液；物质的量浓度分别为2 mol/L和0.015 mol/L的氯化钠溶液；二苯胺试剂。
用具
铁架台、铁环、镊子、三角架、酒精灯、石棉网、载玻片、玻璃棒、滤纸、滴管、量筒、烧杯(不同大小)、试管、漏斗、试管夹、纱布。
做法指导：
指导学生预习：结合教材的知识结构和实验目标预习该实验内容，从理论上掌握鸡血细胞的获取；鸡血细胞核物质的提取及纯化和鉴定方法。
指导学生提取：(1)让鸡血细胞在低渗溶液中吸水胀破，释放最多的DNA；(2)让DNA处在0.14 mol/L的氯化钠溶液中尽可能地析出。(3)用预冷的95％的酒精尽可能除去其他细胞物质，得到更纯化的DNA。
课时安排： 1课时
教学过程：
引入提问：1.DNA的化学组成和主要功能是什么?
2.DNA主要存在于细胞的什么结构中?
3.为什么说染色体是遗传物质的主要载体?
上一节课我们学习了染色体是遗传物质的主要载体，且通过两个经典实验证明了DNA是遗传物质，那么细胞中是否有DNA呢?这节课通过实验证明。
教学目标达成
实验十一 DNA的粗提取和鉴定
制鸡血细胞液(加抗凝剂) 获得鸡血细胞(离心或静置) 获得鸡血细胞核物质（提核物质 溶解 析出 溶解 析出） 鉴定DNA（用二苯胺）
学生操作：强调要把握浓度
分组指导：
1.制鸡血细胞。由教帅课前完成，但要明确柠檬酸钠溶液的作用和离心、静置的目的。
2.获得鸡血细胞核物质
a.应用低渗原理和机械搅拌使细胞破裂并过滤。这是关键步骤：直接决定提出的核物质多少及实验结果。
b.溶解细胞核内的DNA：用2 mol/L的氯化钠溶液。
c.析出含DNA的黏稠物并过滤。这又是一关键步骤，要亲自指导；(1)要慢慢注入蒸馏水，防止加入过量再重新溶解(即把握浓度达到0.14 mol/L)。(2)轻轻沿一方向搅拌，有利于DNA的析出、附着、缠绕。
d.再溶解DNA的黏稠物并过滤。用浓度为2 mol/L的氯化钠溶液。
e.提取含杂质较少的DNA。用预冷的95％的酒精，原因：(1)可抑制核酸水解酶活性，防止降解。（2）降低分子运动，易于形成沉淀析出。(3)低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。注意观察丝状物的颜色。
3.DNA的鉴定：用二苯胺在沸水浴与DNA出现蓝色。注意设立对照实验。
注：多年的教学经验得出：(1)学生在操作中常常产生不能形成粘稠物，制取的DNA粗制品有红色(血红蛋白的颜色)或由于加入溶液和搅拌过程不科学导致实验现象不明显等现象，所以在关键步骤中要亲自指导。 (2)实验过滤时用两层纱布效果较好。(3)使用玻璃棒时用细玻璃棒效果更佳。
为了加深学生理解本实验过程各步骤使用的溶液，投影显示如下表格并讨论：
方法步骤 加入物质 目的
1.制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液 ①
2.提取鸡血细胞的细胞核物质 20ml蒸馏水 ②
3.溶解细胞核内DNA 2mol/L的NaCl溶液40ml ③
4.析出含DNA的黏稠物 蒸馏水 ④
5.滤取含DNA的黏稠物 ⑤
6.将DNA的黏稠物再溶解 2mol/L的NaCl溶液20ml ⑥
7.过滤含DNA的NaCl溶液 ⑦
8.提取含有杂质较少的DNA 冷却的95％的酒精50ml ⑧
9.DNA的鉴定 A：（1）向试管中加入0.015mol/L的NaCl溶液5ml（2）加入DNA（3）4ml二苯胺溶液 ⑨
B：（1）向试管中加入0.015mol/L的NaCl溶液5ml（2）4ml二苯胺溶液 ⑩
学生活动：讨论、回忆并回答
①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝
②加速血细胞破裂
③溶解DNA
④使2 mol/L的NaCl溶液稀释至0.14 mol/L，使得DNA最大限度地析出
⑤使含DNA的黏稠物被留在纱布上
⑥使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中
⑦除去含DNA的滤液中的杂质
⑧提取DNA
⑨A：出现蓝色
B：无变化
4.结论与讨论： 出示投影片，给出如下讨论提纲，供学生讨论。
(1)DNA的粗提取过程中关键有哪几步?
(2)提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液?
(3)DNA的直径约为2 nm，实验小出现的丝状物的粗细是否表示一个DNA分子直径的大小？
学生活动：七嘴八舌展开讨论
师生归纳：(答案)
(1)a.提取鸡血细胞的细胞核物质，应用低渗原理和机械搅拌得到最大量的DNA。
b.析出含DNA的黏稠物，加蒸馏水要慢慢，搅拌要轻轻，否则实验会失败。
c.沉淀DNA时必须用冷酒精。
(2)DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以要除去上清液(含有蛋白质)。
(3)实验中出现的丝状物是肉眼可以观察到的，这种丝状物的直径要比DNA分子的直径2 nm大许多倍，所以实验中出现的丝状物的粗细并不表示一个DNA分子直径的大小。
实验结论：细胞中有DNA，DNA与二苯胺试剂在沸水浴中变蓝色。
教学目标巩固
1.实验中步骤1和步骤3都需要加入蒸馏水，两次加入的作用相同吗?为什么?
2.实验中NaCl的物质的量浓度为2 mol/L和0.14mol/L对DNA有何影响?
( D )3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成
A.砖红色 B.橘黄色 C.紫色 D.蓝色
布置作业：
将实验中观察到的现象和得出的结论填写在《实验报告册》
结课
这节课咱们验证了细胞是由化合物按照一定的方式组成的这一结论。从知识结构角度来说，一定要加深对生物的物质性理解；二要掌握一般的物质提取方法；三要注意不同的化学物质要用不同的原理鉴定，从实验过程角度来说，要理解各种溶液和试剂的作用和目的。
教后分析： DNA的制备，关键是对杂质的去除，所以教材中DNA的析出与获取一步中，最好用离心代替沉淀。如果发现获得的DNA量较小的话，可在冰箱中进行DNA的乙醇沉淀，并且可以将多个小组的产物集中在一个试管中进行鉴定。
该实验一课时完成非常紧张，建议实验结束后，安排一节讨论课，一方面分析实验得失的原因和相应改进方法；另一方面通过相关题例的分析讨论，既巩固了DNA的知识结构，又对日后的知识迁移铺平道路。